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支原体祛除剂加强型MynoxGold（保种用）步骤详解
点击次数：3543 发布时间：2019/12/27 15:47:04
一个疗程它由1管首次治疗液和3管主治疗液（），每管均为520μl即用型无菌溶液，2℃~8℃避光保存。首次治疗液可以杀灭大部分支原体，对细胞没有毒害，主治疗液杀灭所有剩余的支原体，实现彻底根除。
其操作示意图如下：
实验所需耗材：25cm2
细胞培养瓶或60 mm 培养皿
支原体消除结果评估：采用支原体检测试剂盒如Venor® GeM系列。
具体操作步骤如下（超净台内操作）：
1. 制备“首次治疗混合液”
1）吸量管吸取4.5ml含5%胎牛血清的细胞培养基，加入到无菌的15ml离心管中。再加入500 µl Mynox ® Gold首次治疗液（橘黄色盖）。
2）将15ml离心管内的培养基和Mynox® Gold首次治疗液混匀。
3）将15ml离心管内的混合液（5ml）转移至无菌的25cm2细胞培养瓶或60 mm 培养皿中。
2. 加入细胞
按细胞正常传代来操作。对于贴壁细胞，使用胰酶将细胞解离打散。
1）注意：显微镜下观察，确保为单细胞悬液，无细胞成团。
2）吸量管吸取5ml单细胞悬液（含104–105细胞，细胞培养基含5%胎牛血清），加入到上述的“首次治疗混合液”中。此时总体积为10ml。
注意：加入细胞时，吸头插入到液面下，以避免产生气溶胶。吸头不要触及培养瓶/皿的内壁。
3）轻轻摇晃培养瓶/皿，以避免细胞分布不均。将细胞转至孵箱正常培养。
3. 主要治疗
1）细胞长至80~90%汇合。
2）细胞正常传代。取9.5ml已加新鲜培养基的细胞，加到无菌培养瓶或培养皿中。再加入500 µl Mynox® Gold主治疗液（透明管盖）。调整胎牛血清浓度，请勿再加至5%。应低于该浓度。
3）加入主治疗液的细胞继续培养，再重复以上步骤2次（采用Mynox® Gold主治疗液 治疗2次）。
第3次主治疗液治疗后，支原体即完全去除（细胞总共传了4代）
4. 支原体残留的检测
注意：支原体被Mynox®裂解后会释放DNA到培养基中，此时检测支原体会导致假阳性。应再正常培养四代后检测支原体。培养基更换和使用外源DNA酶可在1-2代内降低游离的支原体DNA。
建议采用高灵敏度的Venor ® GeM支原体检测试剂盒检查支原体。
原创作者：北京缔一生物科技有限公司
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