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透析胎牛血清的应用
点击次数:794 发布时间:2020/4/23 21:16:43
a. 细胞培养条件下稳定同位素标记技术(简称SILAC)。
这是一项以质谱为基础的定量蛋白质组学技术,全称为Stable isotope labeling with amino acids in cell culture (SILAC)。它将13C或15N标记的氨基酸掺入到培养基中培养细胞,来标记细胞内新合成的蛋白质,一般培养5-6代,细胞中的蛋白质将都被同位素标记。然后质谱分析,即可比较经过不同处理的细胞,其内部蛋白质丰度的变化。它还可用于正常细胞与病理状态细胞二者的比较。为避免胎牛血清中天然氨基酸的干扰,这时就需要用到透析胎牛血清,以保证掺入细胞蛋白中的氨基酸均为标记氨基酸(常采用赖氨酸或精氨酸)。
b. 工程细胞株的筛选。
以常见的工程细胞株CHO-DFGRˉ为例,该细胞自身缺乏二氢叶酸还原酶(DHFR),必须在添加了次黄嘌呤、胸腺嘧啶和甘氨酸的培养液中才能得以存活。如将含有目的基因与DHFR基因的质粒转染细胞,则可以得到在不含上述添加剂的培养基上也能生长的细胞克隆。通过甲氨蝶呤(MTX)进一步筛选,可进一步得到能表达大量目的蛋白的细胞克隆。这时的胎牛血清由于不含有次黄嘌呤和胸腺嘧啶等,也常作为选择培养基的一部分,参与阳性转染细胞克隆的筛选。
c. 研究某些因子如核苷酸或微量元素如硒、锌对某种类型细胞增殖、分化的影响。
这时也需要用透析胎牛血清,以避免培养体系中天然存在的这些物质的干扰。
Ausbian透析胎牛血清特点:
1.极低内毒素,支持各类难养细胞;
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