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悄然的技术升级——冻干粉让支原体检测更稳定、更灵敏

点击次数：6393 发布时间：2024/1/11 15:59:11

随着细胞治疗等生物医药产业迅猛发展，各国法规和相关机构，也逐步加强了，对生物制品安全性和可靠性的监管。其中支原体检测，是一个关键项目。在各国药典中均指出，可以使用经过方法学验证的核酸法，可替代培养法和指示细胞法，对相关生物产品进行支原体检测。因此，在进行支原体检测实验时，应选择通过方法学验证的qPCR试剂盒，兼顾灵敏度和特异性，实现高效且精准的检测。

如何实现检测的高效与精准

生物试剂，尤其是具有活性或功能的试剂，对于产品的剂型、储存方法、运输温度都有比较高的要求。

剂型决定了产品本身是否稳定，而稳定性又进一步决定了产品储存和运输甚至是使用方法的难易程度。稳定性越好的产品，对于储存、运输过程的温度要求相对更简单，操作难度小，产品则更易保留更大的活性，更容易实现高效且精准的qPCR检测结果。

qPCR液体试剂

用于方法验证的支原体检测试剂盒以qPCR法为主。目前，市场上大多数支原体检测类的qPCR试剂盒，其试剂多以液体剂型为主。液体液试剂的特点

实际生产、运输、使用过程中，液体试剂很容易发生失活的情况：

液体活性试剂需要-20℃储存，在运输过程中，为了保持温度，往往需要干冰运输，而干冰易挥发，增加了运输难度。在使用过程中，也需要先在冰上结冻，再使用，再次增加了反复冻融带来的失活风险。

qPCR冻干粉试剂

为了克服液体试剂的缺点，尽可能保留生物试剂的活性不因温度的改变而被破坏，德国MB公司的qPCR检测试剂盒，采用了新型的冻干粉剂型。

冻干粉试剂由于去除水分，可以更好地保持物质活性，防止微生物生长、减缓氧化反应，相较于液体试剂更不容易失活，更适合长期保存、远距离运输或高灵敏度的实验。

稳定性强：冻干粉试剂在制备过程中经过冷冻和真空干燥处理，去除了水分，活性物质处于“休眠状态”，进而有助于提高试剂的稳定性。避免了液体试剂可能受到环境湿度、温度等因素的影响，容易发生降解，从而影响实验结果的缺点。

运输条件相对简单：因此相比于液体试剂，冻干粉试剂更适合长期存储和运输，对温度的要求也宽松，4℃（冷链温度：2-8℃）即可，减少了对冷冻设备的依赖，操作运输简便且容错率高，避免了液体试剂保存过程中可能引起的失活可能性。

降低污染可能性，适合长期储存和长时间运输，结果更可靠：由于水分被去除，也减少了其中微生物生长繁殖的可能性，降低了试剂被微生物污染的风险。因此，与液体试剂相比，冻干粉试剂更适合长期保存与运输，进一步提高结果的可靠性。

降低氧化反应：水溶液的存在，容易促使一些氧化反应的发生，从而导致试剂失活。冻干粉中的低水分含量有助于防止这些氧化反应的发生，维持试剂的活性。

复溶后即可开始实验，易于配制：冻干粉试剂的配制相对简单，只需加入适量的溶剂即可重新溶解。这不仅减少了操作过程中的出错可能性，还降低了试剂的使用成本。相比之下，液体试剂的配制可能需要更多的步骤，而且容易受到人为误差的影响。此外，冻干粉试剂无需冷藏，便于储存和运输，为实验室提供了更灵活的管理选择。

综上所述，相较于液体试剂，冻干粉试剂是qPCR实验中更好的选择，尤其是在支原体检测方法验证这类对于实验灵敏度、特异性等方面有高要求的实验中。然而，冻干粉试剂的制作，对于工艺的要求更高，需要保证试剂的活性不在制作过程中造成损失。市面上，德国Minerva Biolabs公司，专注于支原体qPCR冻干粉试剂（Venor Gem qEP）工艺，使用时复溶即可，尽可能保持试剂的更高活性，为支原体检测提供更稳定准确的结果，完成高灵敏度、强特异性的方法验证，遵循欧洲药典流程要求，已帮助国内外众多项目通过方法学验证。

原创作者：北京缔一生物科技有限公司