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如何真正有效的杀死支原体

点击次数：12130 发布时间：2017/6/23 15:18:10

现在，市面上的支原体清除剂大多是抗生素类的，主要是三种：四环素类、大环内酯类和喹诺酮类。本文威正翔禹/缔一生物为您分析如何真正有效的杀死支原体。

它们对支原体的清除作用主要是抑制，而非直接杀死支原体。因此它们的效果不能持久，还会产生支原体的耐药和细胞毒。要想真正有效的杀死支原体，只有德国Minerva Biolabs公司的Mynox®及Mynox® Gold产品。

Mynox®取自枯草杆菌发酵后的提取物。由于支原体没有细胞壁，只有简单的质膜。Mynox®基于生物物理原理，只与支原体膜特异性结合，改变支原体膜的通透性，导致支原体破裂死亡，而哺乳动物细胞能迅速返回它的原来形态，并保持正常的增殖速率。直至今日，Mynox®还没有显示任何导致正常细胞特性的改变。

注意：Mynox®用于清除细胞培养和病毒培养以及生物样本中的支原体和无胆甾原体，仅限于基础研究使用。

下面，简单介绍一下Mynox®及其用法：

Mynox®：无菌即用型，pH7.4，220µl/管，每管用1次

货号#10-0200 2 管

货号#10-0500 5 管

货号#10-1000 10 管

2-8°C保存。室温运输

建议采用DMEM或RPMI 1640培养基，5%FCS。如果清除病毒中的支原体，应使用无血清培养基。如果是贴壁细胞，应用胰酶消化，把细胞打散为单细胞，保证细胞与Mynox®充分接触，从而更有效地杀除支原体。

Mynox®的细胞毒效应在10%~80%，依赖于作用时间长短。通常能保证有充分存活的细胞应用于继续培养。支原体的高清除率带来更高的细胞增殖速率，能够弥补细胞毒带来的损失。

Mynox®用法：

1、贴壁细胞

150px培养皿中，先后加2.8ml培养基（5%FCS），Mynox®200 µl，2 ml 细胞（1x104~1x105）。细胞继续培养2小时，即完成治疗，即可换液。治疗可持续3-8天，不过需注意观察细胞状态。

2、悬浮细胞

无菌离心管里先后加1.6ml 含0.125%胰酶和5mM EDTA PBS，Mynox®200 µl，1.6 ml细胞（细胞数1x104~ 1x105，10%FBS）。室温孵育30分钟即完成治疗，即可将细胞离心换液。（注意：胰酶作用是防止细胞聚集。如不用胰酶解离细胞，可用培养基代替胰酶。要保证细胞与Mynox®混合物的总体积为3.4ml，必要时添加PBS。）治疗也可持续3天，不过要观察细胞状态。

3. 无包膜病毒

1.5ml无菌离心管中加入1ml无血清培养基、100 µl Mynox®、125 µl病毒株和FBS（<8%）。轻轻摇匀，室温培养2小时后即完成治疗。可用培养基将Mynox®稀释为1:10，终止反应。注意：在病毒感染宿主细胞前，应检查宿主细胞系是否有支原体污染。

4、包膜病毒

注意：起始病毒滴度应>106TCID50，以保证有足够病毒能继续进行下游培养。

15ml无菌离心管中加入4.4ml无血清培养基、100µlMynox®、0.5ml病毒株和FCS（<8%）

混合物总体积为5 ml。轻轻摇匀，室温培养30分钟即完成治疗。终止方法同上。注意：在病毒从细胞培养液中收集时，可多次使用这个支原体去除过程，以确保所有支原体已被清除。

支原体清除效果鉴定：

治疗后细胞或病毒可正常传代四次后再检测。因为支原体被杀死后，会释放游离DNA到培养液中，此时检测会有假阳性。推荐使用Minverva公司高敏感的Venor®Gem支原体PCR检测试剂盒。

原创作者：北京缔一生物科技有限公司